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RCM 超高分辨多重掃描共聚焦顯微鏡

多重掃描共聚焦技術(shù),光學(xué)分辨率達(dá)到170nm,去卷積后120nm

信噪比提升4倍,增加系統(tǒng)靈敏度

樣本平面的激光強(qiáng)度僅有納瓦等級,適合做長時間活細(xì)胞成像

搭配普通顯微鏡,輕松升級成共聚焦顯微鏡


詳情

產(chǎn)品原理

        由于光學(xué)衍射的限制,標(biāo)準(zhǔn)激光掃描共聚焦顯微鏡的光學(xué)分辨率是240nm,而且價格昂貴。荷蘭Confocal.nl的RCM(超高分辨多重掃描共聚焦顯微鏡)可安裝在普通熒光顯微鏡的port上,利用RCM技術(shù)(Re-scan Confocal Microscopy,重掃共聚焦顯微技術(shù))為原顯微鏡增加一個共聚焦光路,得到超高分辨共聚焦圖像(光學(xué)分辨率達(dá)到170nm,去卷積后達(dá)到120nm),圖像更銳利,細(xì)節(jié)更明顯。RCM還增加了靈敏度,信噪比是原來的4倍。樣本平面激光強(qiáng)度僅nano-watt水平,可顯著降低光毒性和光漂白性,適合長時間活細(xì)胞共聚焦成像。它在提升分辨率和靈敏度的同時,也可改進(jìn)原顯微鏡的z-stack 3D切片功能,適合做3D共聚焦成像。


重掃共聚焦顯微技術(shù)原理圖:


重掃描原理圖.png


可兼容的顯微鏡型號(以下為推薦型號,具體型號可咨詢):


兼容的顯微鏡類型.png


產(chǎn)品特點(diǎn)

1.   結(jié)構(gòu)特點(diǎn):采用數(shù)字掃描技術(shù),雙向掃描,提高成像速度;搭配較大的光學(xué)元件,適合更高NA值的40X至100X的物鏡,可得到寬闊的視野和明亮的圖像。

2.   更好的信噪比:信噪比提升4倍,增加系統(tǒng)靈敏度。

3.   更高的靈敏度:微弱熒光強(qiáng)度的圖像也可獲取。

4.   更高的橫向分辨率:分辨率提升1.4倍,重掃后達(dá)到超分辨率170nm,重掃+去卷積可達(dá)到120nm。圖像更銳利,細(xì)節(jié)更明顯。

5.   激光強(qiáng)度弱:樣本平面的激光僅有nano-watt等級,光毒性和光漂白性極弱,適合做長時間活細(xì)胞成像。

6.   可做長時間活細(xì)胞成像:高分辨率、高靈敏度,且激光強(qiáng)度弱,長時間成像對細(xì)胞傷害小。

7.   掃描速度:圖像大小為512x512像素時為2 fps(每秒2幀),一般掃描為5 fps(每秒5幀),最快可達(dá)到10 fps(每秒10幀)。

8.   改進(jìn)3D切片成像功能:可用于多層掃描及3D影像構(gòu)建。

9.   多達(dá)4個熒光通道:激發(fā)光分別為:405nm、488nm、561nm、640nm。

10.  無需圖像后處理:為光路設(shè)計(jì),在成像時即提供更高的分辨率和靈敏度,無需進(jìn)行圖像后處理,節(jié)省時間。

11.  用戶友好型操作模式:短時間培訓(xùn)即可操作。

12.  開放型系統(tǒng)設(shè)計(jì):升級您目前已有的顯微鏡,兼容多類圖像處理軟件。

13.  靈活的配置:可選擇不同生產(chǎn)商的顯微鏡、相機(jī)和激光光源進(jìn)行配置。

14.  性價比高:改造成本低廉,可利用您已有的顯微鏡和配件進(jìn)行改造。


寬場成像和RCM成像的對比:


寬場和RCM的對比-2.png


廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域

適合同時要求高分辨率和高靈敏度的生物學(xué)應(yīng)用,尤其適合低熒光強(qiáng)度的圖像的獲取,如單分子熒光原位雜交檢測(smFISH);可做類器官、斑馬魚胚胎、或更大的活性樣本的深度3D成像和長時間活細(xì)胞成像。


應(yīng)用展示

1、具有超越普通共聚焦顯微鏡的分辨率

鹿皮膚成纖維細(xì)胞樣本:從左到右分別是:大視野圖片、放大的寬場圖片、傳統(tǒng)共聚焦圖片、RCM技術(shù)處理的圖片、Deconvolution(去卷積)處理的圖片。可見RCM和“去卷積”技術(shù)都可以得到比傳統(tǒng)共聚焦技術(shù)更好的分辨率和靈敏度。


成像效果對比圖.png

2、2D細(xì)胞RCM成像

染色的共培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞:40x物鏡(NA 1.4),紅色:肌動蛋白(Actin)、品紅色:MAP2、綠色:Tau,RCM2成像。


染色的共培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞.jpg


染色的果蠅心臟微管:40x物鏡(NA 1.4),綠色:肌動蛋白(Actin)、紅色:肌球蛋白重鏈、藍(lán)色:微管蛋白(Alpha-tubulin),RCM2成像。


染色的果蠅心臟微管.jpg


染色的HUVECs細(xì)胞:黃色:微管蛋白(Tubulin)、紫色:肌動蛋白(Actin)、藍(lán)色:DNA,RCM2成像。


染色的HUVECs細(xì)胞.jpg


染色的BPAE細(xì)胞:40x物鏡(NA 1.4),綠色:肌動蛋白(Actin)、紅色:線粒體(Mitochondria)、藍(lán)色:DNA,RCM2成像。


染色的BPAE細(xì)胞.jpg


3、3D影像重建RCM成像

三維影像重建:處在有絲分裂過程中的Hela細(xì)胞。綠色:細(xì)胞骨架肌動蛋白(Actin);紅色:微管蛋白(Tubulin);藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM1成像。



三維影像重建:觀察老鼠囊胚里胚層細(xì)胞分布的狀況,可以看到囊胚內(nèi)部是中空的。綠色:原始內(nèi)胚層marker:GATA4;紅色:滋養(yǎng)外胚層marker:CDX2;藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM1成像。



三維影像重建:觀察腫瘤球。藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM成像,去卷積處理。


4、長時間活細(xì)胞RCM成像

活細(xì)胞線粒體動態(tài)觀察:10秒拍1張,拍攝了61hr6min,共22000張,最后觀察到細(xì)胞還是存活的,還在分裂,說明激光對活細(xì)胞的毒性很小、傷害很小。


Video

三維影像重建:處在有絲分裂過程中的Hela細(xì)胞。綠色:細(xì)胞骨架肌動蛋白(Actin);紅色:微管蛋白(Tubulin);藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM1成像。
三維影像重建:觀察老鼠囊胚里胚層細(xì)胞分布的狀況,可以看到囊胚內(nèi)部是中空的。綠色:原始內(nèi)胚層marker:GATA4;紅色:滋養(yǎng)外胚層marker:CDX2;藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM1成像。
三維影像重建:觀察腫瘤球。藍(lán)色:細(xì)胞核,RCM成像,去卷積處理。
長時間活細(xì)胞線粒體動態(tài)觀察。10秒拍1張,拍攝了61hr6min,共22000張,最后觀測到細(xì)胞還是存活的,還在分裂,說明激光對活細(xì)胞的毒性很小、傷害很小。

處在有絲分裂過程中的Hela細(xì)胞三維影像

老鼠囊胚里胚層細(xì)胞分布的三維影像

腫瘤球三維影像

長時間活細(xì)胞線粒體動態(tài)觀察

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