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Livecyte 實時細胞功能及單細胞行為分析系統(tǒng)

采用“疊層衍射定量相位成像技術”

得到媲美熒光的高對比度無標記圖像

對數(shù)千個單顆細胞進行自動識別、跟蹤和定量

同時得到細胞群和單個細胞的長時間實時動態(tài)數(shù)據(jù)

自帶培養(yǎng)腔,可以做長時間活細胞實時成像


詳情

產(chǎn)品原理

        “疊層衍射技術”:Livecyte采用“疊層衍射定量相位成像技術”(Ptychographic Quantitative Phase Imaging,Ptychographic QPI):即采用計算成像方法,利用虛擬透鏡(The Phasefocus Virtual Lens?)捕獲衍射光波形成的相對相位偏移信息。同一個樣本可以得到一系列衍射圖像,疊加在一起,通過計算機重組生成高對比度的細胞圖像。


         “疊層衍射技術”原理示意圖:


原理.png


        “疊層衍射技術”在透射光和反射光應用中都有極佳的表現(xiàn)。當提供合適的照明光源和檢測器時,它可以利用電磁光譜中的任意波長的光線進行成像,包括電子和其他粒子波,甚至是聲波。Livecyte就采用這種技術來捕獲相對的相位偏移信息,在無熒光標記和無高功率照明光源的情況下,生成活細胞的高對比度圖像和視頻。適用于最敏感的活細胞(如干細胞、異質性的原代腫瘤細胞、神經(jīng)細胞等)的長期成像(長達數(shù)周)。與傳統(tǒng)的相差成像不同,Livecyte得到的非標記QPI圖像與熒光圖像類似,有極佳的對比度,如明亮的細胞影像和深色的背景(下圖)。與基于群體的成像技術不同,Livecyte可以自動分辨、跟蹤時序成像中的每顆單細胞,得到每顆單細胞隨時間在形態(tài)、行為、干物質(dry mass)等指標上的變化,對單細胞進行識別和表征,從而得到每顆單細胞的完整的表型數(shù)據(jù)。


          Livecyte疊層衍射成像可實現(xiàn)媲美熒光的無標記高對比成像:

媲美熒光-2.png


產(chǎn)品總述

       英國Phasefocus公司的Livecyte“實時細胞功能及單細胞行為分析系統(tǒng)”采用“疊層衍射實時定量成像技術”(Ptychographic QPI),可以在無標記、無高光毒性激光照射的情況下,產(chǎn)生高對比度、無偽影、可定量、高保真度的細胞圖像,并對單個細胞進行自動識別、跟蹤和定量,同時得到細胞群和單個細胞的長時間實時動態(tài)數(shù)據(jù)。

       Livecyte側重于細胞的非標記成像和單細胞特性的記錄,如在非標記狀態(tài)下研究細胞在增殖、分裂、凋亡、分化、遷移等現(xiàn)象過程中的形態(tài)學變化和運動行為的變化,得到形態(tài)學指標(如單個細胞的面積、球形度、干物質量等)和運動學指標(如單個細胞遷徙速度、方向、位移、軌跡等)。可進行無標記識別分析細胞群、細胞譜系等研究。除了非標記疊層衍射實時定量成像,還可做明場和多通道(1-7通道)熒光成像。自帶培養(yǎng)腔,可以做長時間活細胞實時成像。

        廠家Phasefocus在2013年因“疊層衍射實時定量成像技術”被授予“Microscopy Today Innovation Award”,并且Livecyte儀器在2017年又再獲此殊榮。


產(chǎn)品外觀.png


獲獎.png


產(chǎn)品特點

  • 無標記衍射成像:

1.   比起明場、相差成像,Livecyte疊層衍射成像可實現(xiàn)媲美熒光的無標記高對比成像;

2.   無熒光標記下,對細胞傷害更小,適用于干細胞、神經(jīng)細胞及原代細胞等較脆弱的細胞;

3.   如有需要,也可搭配最多七種熒光成像。

  •  獨特數(shù)據(jù)庫與大數(shù)據(jù)篩選分析:

1.   獨特數(shù)據(jù)展示與呈現(xiàn),實驗結果一目了然;

2.   可以實現(xiàn)多參數(shù)、多數(shù)據(jù)間的大數(shù)據(jù)篩選與比較,找出單一參數(shù)無法發(fā)現(xiàn)的細胞行為;

3.   多種類數(shù)據(jù)輸出(原始數(shù)值、圖像、影片、單細胞分割檔案),可用第三方軟件做靈活分析。

  • 自動化單細胞分析+干物質量分析:

1.   可實現(xiàn)自動化分析,根據(jù)形態(tài)學和行為學特征對每顆細胞創(chuàng)建獨特的“表型指紋”,省去繁復耗時的人工圈選步驟;

2.   可實現(xiàn)精確的單細胞分割、單細胞定量,得到每顆細胞的多種參數(shù)進行分析,其他產(chǎn)品少有可做到;

3.   多種參數(shù)及定量化信息:如:細胞匯合度、個數(shù)、單個細胞面積、厚度、干物質量(Dry Mass)、球形度、長寬比、周長、移動速度、瞬時移動速度、移動方向、遷移蜿蜒指數(shù)(Meandering Index)、限制比率(Confinement Ratio)、位移、分裂指數(shù)、倍增時間,等。

4.   可做獨特的干物質量(Dry Mass)分析、無標記細胞譜系示蹤分析、無標記細胞共培養(yǎng)分析,其他產(chǎn)品少有可做到。


細胞無標記時生長更好:

無標記細胞生長更好.png


細胞譜系分析視頻:


廣泛的應用領域

Livecyte適用于細胞增殖、細胞毒性、細胞分裂、細胞吞噬、血管新生、劃痕遷移、趨化運動、細胞運動、T細胞殺傷、細胞譜系研究、細胞共培養(yǎng)、單細胞研究等多個研究領域,尤其是無標記敏感細胞(原代細胞、干細胞、神經(jīng)細胞)分析。


整體應用.png

Livecyte應用展示。

 

無標記情況下,一次實驗就可以獲得多項細胞表型和功能數(shù)據(jù),如:

1、 細胞增殖:獲得細胞個數(shù)、細胞面積、細胞干物質的變化曲線、倍增時間等數(shù)據(jù);

2、 細胞形態(tài):獲得每顆細胞及群體細胞的球形度、周長、長寬比、面積、厚度等數(shù)據(jù);

3、 細胞有絲分裂:獲得發(fā)生有絲分裂細胞的比例,有絲分裂的時間,分裂的細胞總數(shù)等數(shù)據(jù);

4、 細胞生長:獲得每顆細胞干物質,這個干物質是除去水之外的所有細胞成分(如蛋白質、脂質、碳水化合物、DNA等生物分子)的總質量;

5、 細胞運動:獲得每顆細胞運動的軌跡、速度、方向、角度、位移、路徑等數(shù)據(jù);

6、 T細胞殺傷:獲得效應細胞與靶細胞的接觸時間,靶細胞上有幾顆效應細胞、效應細胞與靶細胞的命運等數(shù)據(jù);

7、 細胞譜系:可以追溯每顆細胞的來源,輸出譜系圖,對研究細胞的異質性有很好的指導。


類流式多參數(shù)、影像互動分析.png

可以通過30多種參數(shù)進行流式分群分析,洞察更多的細胞功能。


應用展示

1、無標記共培養(yǎng)研究

下圖說明:用 Livecyte 無標記區(qū)分共培養(yǎng)的細胞亞群(原代前列腺癌混合細胞群 vs. TA細胞亞 群 vs. CB 細胞亞群)。對比了三個群的不同參數(shù):細胞速度、遷移蜿蜒指數(shù)(Meandering index)、細胞面積、細胞長寬比、細胞干物質量(Dry mass)、細胞球形度(Sphericity)。


1、無標記共培養(yǎng)研究.png


無標記神經(jīng)細胞共培養(yǎng)

下圖說明:Livecyte可分析細胞平均亮度與亮度分布,無標記下區(qū)分星狀細胞、神經(jīng)細胞及微膠細胞,分群后做單細胞分析。


1、無標記神經(jīng)細胞共培養(yǎng).png


2、細胞譜系研究

可無標記跟蹤細胞的增殖、分裂、傳代、分化、死亡,得到細胞的傳代譜系圖,尤其適合敏感細胞的譜系研究(如原代細胞、神經(jīng)細胞、干細胞)和干細胞的發(fā)育分化研究。

 

下圖說明:對同一個癌細胞群里的不同細胞進行譜系研究,自動進行單個細胞識別(左圖)。右上圖:干物質量(Dry Mass)顯示細胞的生長和分裂,綠色標記細胞(Cell 1)和橘色標記細胞(Cell 2)都在同樣的干物質量下分裂,但每代中綠色標記細胞(Cell 2)生長更快、分裂周期更短。右下圖:細胞的譜系樹,表示從初始單個細胞生長分裂成一群細胞。


2、細胞譜系研究.png


下圖說明:捕捉“罕見事件”:細胞9在第1次分裂后迅速融合(Fusion),表現(xiàn)為干物質量加倍;融合后的細胞繼續(xù)增殖,然后進行第2次和第3次分裂;細胞干物質量一直比普通細胞大。


2、細胞譜系研究-2.png


細胞譜系分析視頻:



3、劃痕遷移研究

對單細胞的自動識別、跟蹤和定量分析可以提供深入的“劃痕遷移”的指標,如細胞運動速度、運動方向和有絲分裂指數(shù),可區(qū)分細胞運動和細胞增殖對“劃痕愈合”的影響,克服基于“匯合度”研究“劃痕愈合”的傳統(tǒng)研究方法的局限性。

下圖說明:Livecyte可自動識別和跟蹤單個細胞,直接檢測細胞的運動;可區(qū)分細胞運動和細胞增殖對“劃痕愈合”的影響。


3、劃痕遷移研究.png


劃痕遷移分析視頻:



4、脂肪細胞分析

下圖說明:可以看到細胞內的一顆一顆高亮度的脂肪顆粒,脂肪顆粒可被分割并定量,計算脂肪顆粒數(shù)目和干物質量。


4、脂肪細胞分析.png

5、細胞毒性分析

下圖說明:研究細胞的凋亡和毒性


5、細胞毒性分析.png


細胞毒性視頻:


6、血管生成分析

下圖說明:可研究血管細胞形成的血管網(wǎng)絡,研究其中的單細胞行為變化。


6、血管分析.png


血管生成視頻:



7、腫瘤球分析

可分析藥物作用下,腫瘤球的周長、面積的定量變化。


7、腫瘤球分析.png


腫瘤球成像視頻:

8、T細胞殺傷研究

T細胞殺傷實驗能在體外研究工程T細胞殺傷靶腫瘤的功效。Livecyte的T細胞殺傷實驗可以提供更多的細節(jié)來確定效應T細胞和靶細胞之間的相互作用動力學,可以從單個細胞著手,自動監(jiān)測和量化效應細胞與靶細胞的總的接觸時間,靶細胞凋亡前的最后一次接觸時間、靶細胞上有幾顆效應細胞、效應細胞與靶細胞的命運等數(shù)據(jù)。

 

0hr和24hr的疊層衍射定量相位成像(QPI)和熒光成像示例如下圖,T細胞無標記,活的靶細胞為紅色熒光標記,凋亡靶細胞為綠色熒光標記,第三列數(shù)據(jù)說明T細胞殺傷靶細胞的程度最明顯:

8、T細胞殺傷-1.png


Dashboard軟件得到的靶細胞接觸的T細胞的數(shù)目、累積T細胞接觸時長和平均T細胞接觸時長如下圖:


8、T細胞殺傷-2.png


T-細胞殺傷視頻:



Video

T細胞殺傷視頻

Livecyte 總體介紹視頻

細胞譜系分析視頻

劃痕遷移分析視頻

神經(jīng)細胞分析視頻

細胞毒性分析視頻

血管分析視頻

腫瘤球分析視頻

T細胞殺傷視頻

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